PCR (research) - anvendelse. Hvad er PCR-teknikken?

PCR er en test, der er blevet brugt til diagnose af mange sygdomme. PCR-metoden gør det muligt at vise den direkte tilstedeværelse af bakterier i organismen og specifikt dens DNA. PCR-test anvendes blandt andre i diagnosen Lyme sygdom. Hvad er PCR-teknikken? Hvad er PCR i realtid?

Indholdsfortegnelse:

1. PCR (test) - hvad er PCR-teknikken?
2. PCR (research) - anvendelse af PCR-metoden
3. PCR (forskning) - Lyme sygdom
4. PCR (forskning) - resultater. Kan de være falske positive?
5. PCR (forskning) - resultater. Kan de være falske negative

PCR (polymerasekædereaktion) er den grundlæggende metode, der anvendes i genetiske og molekylære laboratorier. Det blev udviklet i 1983 af Kara Mullis, der blev tildelt Nobelprisen i 1993 for det.

Hør, hvad PCR-testteknikken handler om. Dette er materiale fra den LYTTENDE GODE cyklus. Podcasts med tip.

For at se denne video skal du aktivere JavaScript og overveje at opgradere til en webbrowser, der understøtter HTML5-video

PCR (test) - hvad er PCR-teknikken?

PCR-test består af multipel amplifikation (normalt 30-40 cyklusser) af et specifikt DNA-fragment, fx gener, der koder for Borrelia-proteiner, ved anvendelse af polymeraseenzymet.

Derefter anvendes specielle molekylære farvestoffer til at synliggøre det amplificerede DNA-fragment. PCR er på grund af amplifikationen af ​​specifikke DNA-fragmenter en ultrafølsom metode.

I PCR-metoden amplificeres DNA-fragmenter med specifikke primerpar for en given region af det bakterielle DNA. F.eks. Er målregioner i PCR anvendt til diagnosen Lyme sygdom gener, der koder for proteiner, f.eks. 16S rDNA, recA, fla, p66, OspA.

Det biologiske materiale, hvorfra testen kan udføres, er:

• blod
• en del af huden fra et vandrende erytem
• cerebrospinalvæske
• synovialvæske eller fra ledbrusk
• urin

PCR (research) - anvendelse af PCR-metoden

Ud over diagnosen Lyme borreliose ved hjælp af PCR-metoden er det muligt at detektere specifikke DNA-fragmenter af andre mikroorganismer eller mennesker. Derfor bruges PCR-metoden også i:

• diagnostik og overvågning af virusinfektioner: herpesvira (herpes, herpes zoster, Epstein-Barr, cytomegalovirus), HIV, hepatitisvira (HBV og HCV)
• diagnostik og overvågning af bakterielle infektioner, især de bakterier, der ikke kan identificeres gennem kulturer, f.eks. tuberkulose
• diagnostik og overvågning af neoplastiske sygdomme: leukæmi, brystkræft, kolorektal cancer, lungekræft
• diagnose af kræft disposition: bryst- og ovariecancer (BRCA1 og BRCA2 gener), kolorektal cancer (APC og CHEK2 gener)
• diagnostik af genetiske sygdomme: hæmokromatose (HFE-gen), thalassæmi (HBA1- og HBA2-gener), cøliaki (HLA-gener)
• faderskabstest, der opdager barnets og farens DNA-kompatibilitet

Læs også: Lyme sygdomstest - hvordan de ser ud, og hvad er prisen på Lyme sygdomstest Western Blot test og Lyme sygdom. Fortolkning af testresultaterne Flåtbårne sygdomme: borreliose, babesiose, bartonellose, TBE og andre.

I øjeblikket er der mange ændringer af PCR-metoden. F.eks. Anvendes i diagnosen Lyme borreliose hovedsageligt metoderne til indlejret PCR og realtids PCR. Sidstnævnte er en kvantitativ metode og tillader bestemmelse af det nøjagtige antal Borrelia DNA-kopier i det testede biologiske materiale.

PCR (forskning) og Lyme sygdom

Serologiske tests er grundlaget for diagnosen Lyme-sygdom. Der er dog kliniske situationer, der kan medføre, at disse tests er falske negative:

• serologisk vindue, dvs. den indledende periode med infektion, hvor kroppen endnu ikke producerer specifikke IgM- og IgG-antistoffer mod Borrelia spirocheter
• hos mennesker med immundefekt, der ikke producerer nok antistoffer
• tilstedeværelsen af ​​immunkomplekser, der består af Borrelia spirochetes-antigener og specifikke antistoffer for dem og forhindrer påvisning af antistoffer ved serologiske metoder

Hvis der mistænkes symptomer på Lyme-sygdom hos patienten, og de serologiske testresultater er negative, kan der udføres molekylære tests baseret på PCR-metoden.

DNA fra Borrelia spirocheter kan påvises i den tidlige fase af infektionen, da antallet af spirocheter i kropsvæsker er det højeste.

Ved diagnosen Lyme borreliose anvendes primært serologiske metoder som ELISA, men i nogle kliniske situationer er genetiske tests ved hjælp af PCR-metoden nyttige.

Jo længere tid fra infektion, desto mindre sandsynligt er det at detektere bakterielt DNA. Derfor, i nogle tilfælde, inden PCR-testen udføres, dyrkes bakterier på specielle medier i 1-2 uger, og derefter udføres testen.

Denne fremgangsmåde anvendes i tilfælde af mistanke om Lyme-sygdom og høstet cerebrospinalvæske. I den sene infektionsfase er det mere passende at udføre en ELISA-test.

PCR-metoden bør ikke anvendes i den rutinemæssige diagnose af Lyme borreliose på grund af manglende standardisering med hensyn til forekomsten af ​​Borrelia burgdorferi-sorter i Polen.

I tilfælde af diagnosevanskeligheder (især i den tidlige fase af sygdommen) hjælper resultatet af PCR-testen dog i diagnosticeringsprocessen.

Et positivt testresultat betyder, at tilstedeværelsen af ​​Borrelia burgdorferi DNA og dets sorter blev påvist i det testede materiale, men det forklarer ikke, om en aktiv infektion finder sted i kroppen. På den anden side udelukker et negativt resultat ikke tilstedeværelsen af ​​bakterier i kroppen.

Nogle laboratorier tilbyder test for tilstedeværelsen af ​​Borrelia DNA i kryds. Imidlertid er resultatet af en sådan undersøgelse ikke grundlaget for diagnosen Lyme-sygdom hos en bidt person.

Anbefalet artikel:

ELISA-test - hvad registrerer den? Hvordan læses resultaterne? Prisen på testen

PCR - resultater. Kan de være falske positive?

PCR er en ultrafølsom metode og samtidig meget følsom over for forurening. Derfor er det meget vigtigt i PCR-baserede tests at vælge en passende intern kontrol for at udelukke falske positive.

Nøglen er også den korrekte samling af materiale til test samt erfaringen og pålideligheden af ​​diagnostikeren, der udfører testen.

PCR - resultater. Kan de være falske negative

Som i enhver laboratorietest, også i PCR-metoden, kan der forekomme falske negative resultater. Her er det afgørende at samle blod til et passende antikoagulant, da nogle af dem, såsom heparin, kan hæmme PCR-reaktionen.

Også indsamling af materiale efter påbegyndelse af antibiotikabehandling kan medføre et fald i effektiviteten af ​​PCR-reaktionen og en større sandsynlighed for falske negative resultater.

Det skal også huskes, at Borrelia-bakterier lever i meget kort tid i blodet og kropsvæsker, fordi de takket være specielle receptorer trænger meget hurtigt ind i "svære at nå" steder i kroppen.

Derfor er antallet af Borrelia spirocheter i biologisk materiale i modsætning til diagnosticering af andre mikroorganismer lille, undertiden endda ved detektionsgrænsen for PCR-metoden. Dette kan også forårsage en falsk negativ.

Anbefalet artikel:

Test af lymfocyttransformation (LTT)

Litteratur

1. Dunaj J. et al. Betydningen af ​​PCR-metoden i diagnosen Lyme borreliose. Gennemse Epidemiol. 2013, 67, 119 - 123.
2. Laboratoriediagnostik af flåtbårne sygdomme.Anbefalinger fra arbejdsgruppen: National Chamber of Laboratory Diagnosticians, National Institute of Public Health-National Institute of Hygiene, National Consultant in the field of infectious sygdomme, Department of Infectious Diseases and Neuroinfections, Medical University of Białystok, Polish Society of Virology, Warszawa 2014.
3. Ružić-Sabljić E. og Cerar T. Fremskridt i den molekylære diagnose af Lyme sygdom. Ekspert Rev Mol Diagn. 2017 jan; 17 (1): 19-30.
4. Valones M.A.A. et al. Principper og anvendelser af polymerasekædereaktion inden for medicinske diagnostiske felter: en gennemgang. Braz J Microbiol. 2009 Jan-Mar; 40 (1): 1-11.

Om forfatteren

Karolina Karabin, MD, ph.d., molekylærbiolog, laboratoriediagnostiker, Cambridge Diagnostics Polska Uddannet som biolog med speciale i mikrobiologi og laboratoriediagnostiker med over 10 års erfaring i laboratoriearbejde. En kandidat fra College of Molecular Medicine og medlem af det polske selskab for human genetik. Leder af forskningsstipendier ved Laboratoriet for Molekylær Diagnostics ved Institut for Hæmatologi, Onkologi og Interne Sygdomme ved det medicinske universitet i Warszawa. Hun forsvarede titlen som læge inden for medicinsk videnskab inden for medicinsk biologi ved det 1. fakultet for medicin ved det medicinske universitet i Warszawa. Forfatter til mange videnskabelige og populærvidenskabelige arbejder inden for laboratoriediagnostik, molekylærbiologi og ernæring. På daglig basis, som specialist inden for laboratoriediagnostik, driver han den materielle afdeling hos Cambridge Diagnostics Polska og samarbejder med et team af ernæringseksperter på CD Dietary Clinic. Han deler sin praktiske viden om diagnostik og diætterapi af sygdomme med specialister på konferencer, kurser og i magasiner og hjemmesider. Hun er især interesseret i indflydelsen af ​​moderne livsstil på molekylære processer i kroppen.